La
Calidad en el Laboratorio de Microbiología:
una propuesta de aplicación práctica
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CONTROL
DE CALIDAD
Recomendaciones
de ENAC sobre control de calidad.
Aseguramiento de la calidad de los resultados / control de calidad (EN
45001, Punto 5.4.2 e y f; Guía ISO 25, apartado 5.6; UNE 17025)
El aseguramiento de la calidad es un programa de
actividades llevadas a cabo por un laboratorio con la finalidad de mejorar
en conjunto su funcionamiento. Estas actividades incluyen:
-
promoción del uso rutinario del control de calidad interno
-
medidas adoptadas para mejorar la reproducibilidad, tanto dentro del laboratorio (programa de control interno) como entre laboratorios (programa de control externo),
-
ya sea por medio de cursos de formación, conferencias o estudios intercolaborativos de métodos de laboratorio.
1.1.- Control
interno de calidad
-
recuentos cruzados entre analistas,análisis duplicados de una misma muestra por distintos analistas,
-
uso de materiales de referencia (como cepas de referencia, sueros de referencia de características conocidas, etc),
-
técnicas estadísticas, etc.
1.1.1.- Cepas de referencia y cepas
de trabajo: Definiciones y uso
a) Cepas de referencia: Microorganismos obtenidos de una colección nacional o internacional reconocida.
b) Cepas de reserva: Cepas obtenidas a partir del cultivo de una cepa de referencia preparada y conservada por un laboratorio.
c) Cepas de trabajo: Subcultivos de microorganismos obtenidos a partir de las cepas de reserva para ser utilizados en los ensayos que lo precisen.
Para demostrar la trazabilidad, el laboratorio
debe utilizar cepas de referencia de microorganismos suministrados por
una colección nacional o internacional reconocida. (Ver anexo A1, cepas
de referencia).
Las cepas de referencia se reconstituirán y someterán a los controles de pureza y ensayos bioquímicos que sean necesarios. Serán subcultivadas una sola vez para obtenerlas, de las que se obtendrán las cepas de trabajo. Las cepas de reserva deben conservarse utilizando, una técnica que mantenga las características deseadas de las cepas de referencia, como por ejemplo, liofilización, ultracongelación (-70º C), conservación en nitrógeno líquido, etc.
Las cepas de trabajo, se subcultivan en agar chocolate o agar sangre y se
conservarán en refrigeración durante un período de tiempo que asegure
la viabilidad del microorganismo, no más de un mes (ver anexo A2 sobre
utilización de cepas de referencia).
Cuando se descongelan las cepas de reserva no deben volverse
a congelar y reutilizar.
En general, las cepas bacterianas de trabajo no
deben ser subcultivadas, sin embargo, pueden ser subcultivadas hasta
un número determinado de veces cuando:
a) así lo requieran los métodos normalizadosb) el laboratorio pueda aportar evidencias documentadas que demuestren que no se ha producido pérdida de viabilidad (cuando sea importante), cambios en la actividad bioquímica y/o cambios en la morfología.
Las cepas de trabajo no deben ser subcultivadas
para sustituir a las cepas de reserva.
Anexo 1.- Lugares de obtención de las cepas de referencia
1. Colección española de cultivos tipos (CECT)
2. National Collection of
Type Cultures (NCTC) ( Colección Nacional de cultivos tipo), Central
Public Health Laboratory, 61 Colindale Avenue, London NW9 5HT. (Bacterias, bacteriófagos, micoplasmas, plásmidos)
3. National Collection of Pathogenic Fungi (NCPF) ( Colección Nacional de
Hongos Patógenos), PHLS Mycological 91 Reference Laboratory, Avenue,
London NW95HT (Hongos patógenos)
4. CAB International Mycological
Institute (CMICC); Ferry Lane, Kew, Surrey TW9 3AF. (Hongos aislados, distintos a patógenos humanos
y animales y, levaduras)
5. National Collection of Yeast Cultures (NCYC) (Colección Nacional de Cultivos
de Levaduras), Food Research Institute, Colney Lane, Norwich, Norfolk
NR4 7 UA. (Levaduras distintas a las patógenas conocidas)
6. National Collections
of Industrial and Marine Bacteria Ltd. (NCIMB) (Colecciones Nacionales de Bacterias Industriales y Marinas). 23 St. Machar
Drive, Aberdeen AB2 1RY. (Bacterias
no patógenas, actinomicetos y plásmidos)
7. National Collection of
Food Bacteria (NCFB) (Colección Nacional de Bacterias alimentarias),
AFRC Institute of Food Research, Reading Laboratory, Berks. 23 St. Machar
Drive, Aberdeen AB24 3 RY, Gran Bretaña.
(Bacterias)
8. Culture Collection of
Algae and Protozoa (CCAP). (Colección
de cultivos de algas y protozoos). Dunstaffnage Marine Laboratory, PO Box, 3 OBAN, Argyll
PA34 4AD, Scotland. (Hongos Marinos)
9. Culture Collection of
Algae and Protozoa (CCAP). (Colección
de Cultivos de algas y protozoos). Institute of Freshwater Ecology. The Windermere Laboratory,
Far Sawrey Ambleside, Cumbria LA22 OLP. (Hongos)
10. European Collection
of Animal Cell Cultures (ECACC). (Colección
Europea de Cultivos de células animales). PHLS. Centre for Applied
Microbiology and Research, Porton Down, Salisbury, Wiltshire SP4 OJG.
(Células animales)
11. European Collection
of Plant Pathogenic Bacteria (NCPPB). (Colección Nacional de Bacterias patógenas de plantas). Central Science
Laboratory, Hatching Green, Harpenden, Hertfordshire AL5 2BD. (Patógenos)
12. National Collection
of Wood Rotting Fungil (NCWRF). (
Colección Nacional de Hongos que carcomen la madera). Bio-deterioration Section,
Timbeer Division, Building Research Establishment, Garston, Watford,
Hertfordshire WD2 7JR. (Hongos)
13. Central Bureau Voor
Shimmelcultures (CBS). (Oficina
Central de Cultivos de Mohos), PO Box 273, Oosterstraat 1, NL-3740 AG
Baarn, Netherlands. (Hongos, actinomicetos)
14. American Type Culture
Collection (ATCC). (Colección
Americana de cultivos tipo) 12301 Parklawn Drive, Rockville MD 20852,
USA 15. Microbial Strain
Data Network. (Red de datos
de cepas microbiológicas. Una red internacional de bancos de microbios
y lineas celulares).
15. Institute of Biotechnology,
Cambridge University, 307, Huntingdon Road, Cambridge CB3 OJX . Barbara
Kirsop.
16. CNCM. Collection Nationale
de Cultures de Microorganismes. INSTITURT PASTEUR. 25 Rue du Docteur
Roux 75724 PARIS CEDEX 15
